Potencijalni vodika , ili pH jemjera kiselosti ili lužnatosti tekućine . Važno je u mnogim područjima, uključujući i biologije , kemije i znanosti o okolišu . Mjerenje pH je jednostavan u većini situacija . Lakmus papir može biti umetnuta u tekućinu , a promjene u boji od papira označava stupanj u kojem se tekućina kiseline ili baze . U slučajevima u kojima jefluid koji se testiraju u ćeliji , druge metode moraju biti devised.Things što vam je potrebno
2 ‘ , 7’ -bis – ( 2 = karboksietilna ) -5 ( i -6 ) – karboksifluorescein ( BCECF ) , ili druga tvar koja ima različite fluorescenciju pod različitim uvjetima pH
fluorescencijom spektrofotometar sa duplim monochromators , ili sličan instrument za mjerenje fluorescencije
Centrifuga
unaprijed određenim krivulje kalibracije mjerne korelaciju unutarstanični BCECF i citoplazmičnog pH
Screenshot Prikaži više uputa
1

cool temperaturu uzorka stanica na 41 do 50 stupnjeva celzijusa . To omogućuje bolju brzinu apsorpcije fluorescentnog materijala u stanicama .
2

učitati uzorak stanica s fluorescentnom induciranje tvari kao što BCECF . To je učinjeno dodavanjem BCECF u staničnom mediju , a zatim nježno miješanje smjese tijekom 2,5 sati . BCECF apsorbira kroz propusnu membranu stanica .
3

Razdvojite stanice iz medija i bilo neabsorbirane BCECF pokretanjem uzorka kroz centrifuge . Staviti na ćelije u posebnoj posudi .
4

zagrije uzorak stanica do 98,6 stupnjeva celzijusa tijekom 30 minuta , na približno uvjete unutar ljudskog tijela . Ako se stanice pod pregledom normalno živjeti u nekom drugom okruženju od ljudskog tijela , podešavanje uzorka na odgovarajuću temperaturu .
5

Excite uzorak stanica miješanjem . To pomaže da se poveća fluorescentnu aktivnost .
6

Mjera fluorescentni intenzitet uzorka stanica pomoću spektrofotometar . Za najbolje rezultate , koristite uzbude svjetlost valne duljine od 500 do 510 nanometara . U ovim valnim duljinama , postoji veća površina fluorescentnog intenziteta , tako da je lakše razlikovati rezultate . Fluorescentno Intenzitet se mjeri u odnosu fluorescentnih jedinica ( RFU ) ,omjer svjetlinom tvari u uzbuđen , fluorescentnih države u svoje normalno , unexcited države . VišaRFU ,svjetlijetvari , u odnosu na svoje normalno stanje .
7

Usporedite rezultate spektrofotometar na pre – nacrtana krivulja kalibracije . U pravilu viši fluorescentno znači višu pH u uzorku . S valnom duljinom pobuđenja na 510 nm ,tvar s pH 6.4 će pokazati RFU oko 20 , atvar s pH 9.9 će pokazati RFU oko 55 .
< Br >