Kad obvezujuće nukleinskih kiselina ili proteina ,high – obvezujuće materijal pod nazivom PVDF ( polivinil difluorida ) membrana pruža podršku za antitijela . Putem Western blotting , membrane su složeni zajedno , pripremljeni na antitijela i zatim se osuši . Protokol za sušenje membrane zahtijeva znanje o tome kako raditi membrane , katode ploče , anoda tanjure i primjena metanola rješenja . Uz pravilan protokol ,membrana sigurno veže uz specifičnih antitijela te je spreman za rad, ili skladištenja . Priprema membrane

Priprema PVDF membranu čisti i stabilizira membranu prije transfera . Prije sušenja ,membrana je ” blokirao ” kako bi se spriječilo vezanje s ništa osim specifičnih nukleinskih kiselina , kao što su nespecifičnim antitijela . Tijekom ovog postupka , što mokro membrane tako da je polaganje na ravnoj površini koja je u metanol . Membrane mijenja boju tijekom ove fraze , od neprozirna za poluprozirne . Jednom završi s metanolom kupelji , membrana je smještena u deioniziranu vodu za natapanje oko dvije minute . Membrana mora potopiti opet na metanol rješenje koje je vrlo kisela .

Skupštinu vodenjaka prije prijenosa

Dvije od membranskih radova su natopljene u prvoj otopini metanola i stavljen na ploču anode . Tijekom tog procesa , morate pažljivo provjerite zarobljeni mjehurići zraka , što bi moglo ugroziti prijenos . Drugi komad filter papira natopljen u drugoj otopini metanola i stavi se na vrhu dimnjaka . Gel je zatim ide na vrh membrane , a da pritom ne zamka mjehurića između membrane i primjene gela . Tri nova komadića papira zatim natopljeni katode puferu i stavljen na vrh gela . Ako se pojavi bilo kakav zrak mjehurića ,epruveta radi kako bi izgladio membrane .

Transfer

U ovom dijelu procesa , spojite visokonaponski kabeli za napajanje i odobravaju konstantnu struju na gel prostoru na membranu za 30 minuta . Vrijeme prijenosa će varirati ovisno o tipu protutijela . Nakon 30 minuta , izvadite napajanje i prijenos membranu . U donjem desnom kutu membrane se zatim izrezati provjeriti orijentaciju . Prva dva sloja filter papira se odbacuju , uključujući gel . Bendovi molekularne težine su označena s kemijskom olovkom .
Sušenje

Nakon što se transfer završi , što se osuši membrana na jedan od dva načina . Za brže sušenje ,membrana natopljena 100 posto metanola u trajanju od 10 sekundi kako bi se uklonili bilo vode . Membrana leži na komad papirnatog ručnika 15 minuta . Za postupak sušenja sporije , membrana je smještena na papirnatom ručniku bez dodavanja metanola . Nakon suše ,membrana se može koristiti ili pohraniti na suhom posudi na 4 stupnjeva Celzija za buduće korištenje .