glutation ili GSH jeprotein koji se nalazi u obje biljke i životinje . Ona radi pomoći enzima reakcije u detoksikaciju zagađivača okoliša. Osim toga , to omogućuje transport aminokiselina unutar stanica i pomaže održavanju redukcijske reakcije sulfhidril proteina . GSH Test protokoli koristiti GSH odbojnika , standarde podloge , enzime i reagensa . Nakon specifičan postupak je bitno imati na ishod testa . Enzimski Recikliranje Metoda

Enzimski metoda recikliranja , za GSH , koristi glutation reduktaze kvantificirati GSH . Ovaj protokol je posebno za plazme , tkiva ili kulturan uzorcima stanica . Dodavanje reagensa ( DTNB 5 – 5′ – bis- 2 -nitrobenzojeva kiselina) GSH . Sulfhidrilna skupina u GSH reagira s reagensom i daje žuti kiseline nazivom 5 – tio – 2 – nitrobenzojeve kiseline ( TNB ) . Dodavanje glutation reduktazu na kiseline i GSH smjesu se reciklirati GSH i proizvode kiselinu . U ovom postupku ,stopa kiseline proizvodnje proporcionalan je recikliranje reakcije GSH ; Stoga , mjerenje apsorbancije TNB kiseline pomoću spektrofotometra . Apsorpcija daje procjenu stvarne vrijednosti GSH u uzorku .
Jetrenih stanica glutation Proba

Ovaj protokol analizira količinu GSH u ljudskom hepatocarcinoma (rak jetre stanice ) . Za provođenje ovog postupka , koristite kolorimctriskog metodu za GSH prema smanjivanju i oksidirati GSH . GSH smanjiti upotrebom 5 – 5′ -ditiobis ( 2 -nitrobenzojeva kiselina odnosno DTNB ) u obliku

obojeni produkt 2 – nitro – 5 – thiobenzoic kiseline i oksidirani glutation ( GSSG) . Koristite glutation reduktaza smanjiti GSSG ponovno formirati GSH . Da bi se izmjerila količinu GSH u stanicama jetre , pročitajte uzorak na 415 apsorbiranja kinetičke na čitaču mikro .
Apoptoze stanica

U ovo protokol , GSH se koristi za otkrivanje stanica apoptoza ( smrt) kroz mjerenje smanjenja Redukcija GSH . Smanjenje koncentracije staničnog GSH jepokazatelj stanične smrti . Mrlja uzorke stanica s ne- fluorescentnom thiolite zelene . Thiolite zelena akumulira u citosolu ( plazma stanice ) i mitohondrija ( elektrana ) stanice . Koristite protok Citomeatar na 490/520 nanometara predočiti količinu GSH u stanicama .
Ukupno Koncentracija GSH u životinjskim i biljnim uzorcima

mjerenje koncentracije ukupno GSH u oba reduciranog i oksidiranog oblika u različitim životinjskim i biljnim uzorcima . Dodavanje opće tiolnog reagensa , 5 – 5′ – ditiobis [ 2 -nitrobenzojeve kiseline ] . Tio reagens reagira s GSH u obliku 412 nm kromofora 5 – thionitrobenzoic kiselina ( TNB ) i GS- TNB . Dodaj glutation reduktaze i beta – nikotinamid adenin dinukleotidnu fosfata ( NADPH ) kako bi se smanjila GS- TNB . Glutation će također objaviti drugi TMB molekulu i reciklira GSH . Osim toga , bilo koji oksidirani GSH ( GSSG ), prisutna u smjesi fromed s disulfidnim reakcije također se smanjuje na GSH . Koristite čitaču mikro pri 405 nanometara čitati razinu apsorpcije i navesti ukupan koncentraciju GSH .